免疫荧光 (IF) 或细胞成像技术使用抗体将荧光染料（也称为荧光素或荧光物）标记到特异性目标抗原上，所用荧光染料有诸如异硫氰酸荧光素 (FITC) 等。而通过化学方法偶联荧光素的抗体被广泛使用于IF实验中。

荧光素的使用使得用户通过荧光显微镜（例如表面荧光显微镜和共聚焦显微镜）观察样品中的靶标分布情况。根据荧光素与一抗还是二抗偶联，我们将 IF 方法分为两类：

• 直接 IF-使用单个抗体，该抗体直接指向目的靶标，一抗与荧光素直接偶联。

• 间接 IF-使用两个抗体，一抗未偶联，荧光素偶联的二抗指向一抗，并用于检测。

下图描述了直接和间接方法。

如下表所示，两种方法各有利弊。

直接和间接方法不仅仅限于免疫荧光。它们也与其它依赖于荧光素偶联抗体的技术相关，例如流式细胞术、ELISA 和免疫组化。

检测低丰度蛋白有时很困难，间接检测法也不例外。生物素修饰的抗体可以在原抗原-抗体复合物之外额外增加一层蛋白结合，从而达到信号放大的作用。