厌氧性细菌(Anaerobic bacteria)是一大群种类繁多、专性厌氧,必须在无氧环境中才能生长的细菌。
厌氧菌广泛分布于自然界和人及动物的体内。无芽胞厌氧菌主要存在于人体及动物体内,特别是肠道、口腔、止呼吸道和泌尿道等处,与需氧菌和兼性厌氧菌共同构成机体的正常菌群。在正常菌群中厌氧菌通常占有绝对的优势。正常情况下,菌群保护相对平衡,如长期应用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等,发生菌群失调,或机体抵抗力减退,则可导致内源性厌氧菌感染。
目前已知的重要厌氧菌见表。
表14-1 重要的厌氧菌
一、芽胞菌
梭状芽胞菌属(Clostridium)
二、无芽胞菌
(一)革兰氏阳性球菌
1 消化球菌属(Peptococcus)
2 消化链球菌属(Peptostreptococcus)
(二)革兰氏阴性球菌
韦荣氏球菌属(Veillonella)
(三)革兰氏阴性无芽胞杆菌
1 类杆菌属(Bacteroides)
2 梭形杆菌属(Fusobacterium)
(四)革兰氏阳性无芽胞杆菌
1 双歧杆菌属(Bifidobacterium)
2 乳杆菌属(Lactobacillus)
3 真杆菌属(Eubacteriun)
4 丙酸杆菌属(Propionibacterium)
第一节 厌氧芽胞杆菌
厌氧芽胞杆菌只有一个属,称梭状芽胞杆菌属(Clostridium),简称梭菌属,革兰氏染色阳性,都能产生芽胞,芽胞直径大多比菌体宽,使菌体膨大成梭形,故得名。芽胞的形状和位置在鉴别上有意义。
大多数须在严格厌氧条件下才能生长,少数可在微氧环境中繁殖。
一、破伤风梭菌
破伤风梭菌(Clostridium tetani)是引导起破伤风的病原菌,大量存在于人和动物肠道中,由粪便污染土壤,经伤口感染引起疾病。
(一)生物学性状
破伤风梭菌菌体细长,长4~8um,宽0.3~ 0.5um ,周身鞭毛,芽胞呈圆形,位于菌体顶端,直径比菌体宽大,似鼓槌状,是本菌形态上的特征。繁殖体为革兰氏阳性,带上芽胞的菌体易转为革兰氏阴性。破伤风梭菌为专性厌氧菌,最适生长温度为37℃pH7.0~7.5,营养要求不高,在普通琼脂平板上培养24~48小时后,可形成直径1mm 以上不规则的菌落,中心紧密,周边疏松,似羽毛状菌落,易在培养基表面迁徒扩散。在血液琼脂平板上有明显溶血环,在疱肉培养基中培养,肉汤浑浊,肉渣部分被消化,微变黑,产生气体,生成甲基硫醇(有腐败臭味)及硫化氢。一般不发酵糖类,能液化明胶,产生硫化氢,形成吲哚,不能还原硝酸盐为亚硝酸盐。对蛋白质有微弱消化作用。本菌繁殖体抵抗力与其他细菌相似,但芽胞抵抗力强大。在土壤中可存活数十年,能耐煮沸40~50分钟。对青霉素敏感,磺胺类有抑菌作用。
(二)致病性
破伤风梭菌芽胞广泛分布于自然界中可由伤口侵入人体,发芽繁殖而致病,但破伤风梭菌是厌氧菌,在一般伤口中不能生长,伤口的厌氧环境是破伤风梭菌感染的重要条件。窄而深的伤口(如剌伤),有泥土或异物污染,或大面积创伤、烧伤、坏死组织多,局部组织缺血或同时有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染,均易造成厌氧环境,局部氧化还原电势降低。有利于破伤风杆菌生长。破伤风梭菌能产生强烈的外毒素,即破伤风痉挛毒素(Tetanospasmin)或称神经毒素(Neurotoxin)。破伤风毒痉挛毒素是一种神经毒素,为蛋白质,由十余种氨基酸组成不耐热,可被肠道蛋白酶破坏,故口服毒素不起作用。在菌体内的痉挛毒素是单一和一条多肽链,分子量15万。破伤风毒素的毒性非常强烈,仅次于肉毒毒素。破伤风梭菌没有侵袭力,只在污染的局部组织中生长繁殖,一般不入血流。当局部产生破伤风痉挛毒素后,引起全身横纹肌痉挛。毒素在局部产生后,通过运动终板吸收,沿神经纤维间隙至脊髓前角神经细胞,上达脑干,也可经淋巴吸收,通过血流到达中枢神经。毒素能与神经组织中的神经节工苷脂结合,封闭了脊髓抑制性突触末端,阻止释放抑制冲动的传递介质甘氨酸和γ氨基丁酸,从而破坏上下神经原之间的正常抑制性冲动的传递,导致超反射反应(兴奋性异常增高)和横纹肌痉挛(图14-1)。
图14-1 破伤风痉挛毒素作用的机制
破伤风多见于战伤。平时除创伤感染外,分娩时断脐不洁,手术器械灭菌不严,均可引起发病。新生儿破伤风(俗称脐风)尤为常见。破伤风潜伏期不定,短的1~2天,长的达2个月,平均7~14天。潜伏期越短,病死率越高。发病早期有发热、头痛、不适、肌肉酸痛等前驱症状,局部肌肉抽搐,出现张口困难,咀嚼肌痉挛,患者牙关紧闭,呈苦笑面容。继而颈部、躯干和四肢肌肉发生强直收缩,身体呈角弓反张,面部紫钳、呼吸困难,最后可因窒息而死。病死率约50%,新生儿和老年人尤高。
(三)检验诊断
破伤风梭菌分布广泛,如果病人无临床症状,即使伤口找到破伤风梭菌也不能作为诊断的依据。故破伤风的诊断主要根据有无创伤病史和临床症状,一般不需要作微生物检验,仅在必要时才进行检验。取创伤渗出物或坏死组织镜检,或加热80℃经20分钟以杀死无芽胞杂菌,接种血液琼脂培养基或疱肉培养基中,在厌氧条件下培养24~48小时,挑选可疑菌落进行鉴定,也可取培养滤液0.1毫升接种小白鼠,作毒力和毒力保护试验。
(四)特异防治
破伤风一旦发病,治疗困难,应以预防为主。
1.人工自动免疫平时对战士、建筑工人等接种吸附精制破伤风类毒素全程基础免疫,以刺激机体自动产生抗毒素。儿童则注射白喉、破伤风类毒素混合制剂。当受伤后有可能感染时,应加强免疫一次吸附精制破伤风类毒素。
2.人工被动免疫
(1)紧急预防如遇严重污染创伤或受伤前未经全程基础免疫者,除用类毒素加强免疫外,可再注射破伤风抗毒素(Tetanus antitoxin,TAT)。即在一臂注射抗毒素,另一臂注射类毒素,6~12周后再注射一针类毒素。实践证明,同时注射抗毒素和类毒素,预防效果好,且互不干扰。
(2)特异治疗一旦发现病人,应立即注射破伤风抗毒素,要早期足量,每次可肌肉或静脉注射6~10万单位,注射前必须作皮肤试验,防止马抗毒素血清过敏性休克的发生。国外已开始用人的破伤风丙种球蛋白(Teatanus immunoglobulin, TIG)进行治疗,既可避免过敏反应,还可提高疗效。
大剂量的青毒素(或四环毒)能有效地抑制破伤风梭菌在局部病灶中繁殖,并且对混合感染的其他细菌也有作用,故亦可用于治疗。
若已确诊为破伤风时,应及时采取给予适当的镇静剂和肌肉解痉剂等措施,以减轻病人的痛苦和预防病人呼吸肌痉挛而窒息死亡。
二、产生荚膜梭菌(Cl.perfringens)
产气荚膜梭菌(Cl.perfringens)是气性坏疽的主要病原菌。气性坏疽是战时多见的一种严重的创伤感染,以局部水肿、产气、肌肉坏死及全身中毒为特征。病原菌约有6~9种之多,常为混合感染。以产气荚膜梭菌为最多见(约占60~90%),其次是水肿梭菌和败毒棱菌,其他还有产芽胞梭菌、溶组织梭菌和双酶酸菌等。
(一)生物学性状
为革兰氏阳性粗大梭菌,3~4×1~1.5um。单独或成双排列,有时也可成短链排列。芽胞呈卵圆形,芽胞宽度不比菌体大,位于中央或末次端。培养时芽胞少见,须在无糖培养基中才能生成芽胞。在脓汁、坏死组织或感染动物脏器的涂片上,可见有明显的荚膜,无鞭毛,不能运动。
厌氧程度不如破伤风梭菌要求高。在血液琼脂平板上菌落较大、灰白色、不透明,边缘呈锯齿状,多数菌株有双层溶血环,内环是θ毒素的作用,而外环不完全溶血是a毒素所致。在疱肉培养基中肉渣不被消化,有时呈肉红色。在牛乳培养基中能分解乳糖产酸,使酪蛋白凝固,同时生成大量气体,将凝固的酪蛋白冲成海棉状碎块。管内气体常将覆盖在液体上的凡士林层向上推挤,这种现象称为“汹涌发酵”,是本菌的特点之一。能分解多种糖类,如葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖,产酸产气,不发酵甘露糖或水杨苷,能液化明胶,产生硫化氢,不能消化已凝固的蛋白质和血清。
(二)致病物质和所致疾病
致病条件与破全国各地风梭菌相似。产气荚膜梭菌既能产生强烈的外毒素,又有多种侵袭性酶,并有荚膜,构成其强大的侵袭力,引起感染致病。毒素的毒性虽不如肉毒毒素和破伤风毒素强,但种类多,外毒素有α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν等12种,和具有毒性作用的多种酶,如卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶、胶原酶和DNA酶等,构成强大的侵袭力。根据细菌产生外毒素的种类差别,可将产气荚膜梭菌分成A、B、C、D、E5个型。对人致病的主要是A型,引起气性坏疽和食物中毒。C型则引起坏死性肠炎。在各种毒素和酶中,以α毒素最为重要,α毒素是一种卵磷脂酶,能分解卵磷脂,人和动物的细胞膜是磷脂和蛋白质的复合物,可被卵磷脂酶所破坏,故α毒素能损伤多种细胞的细胞膜,引起溶血、组织坏死,血管内皮细胞损伤,使血管通透性增高,造成水肿。此外,θ毒素有溶血和破坏白血球的作用,胶原酶能分解肌肉和皮下的胶原组织,使组织崩解,透明质酸酶能分解细胞间质透明质酸,有利于病变扩散。
本菌能引起人类多种疾病,其中最重要的是气性坏疽。
1.气性坏疽
以局部剧痛、水肿、胀气、组织迅速坏死、分泌物恶臭,以伴有全身毒血症为特征的急性感染。潜伏期较短,一般只有8~48小时。芽胞出芽大量繁殖,形成荚膜能抵抗吞噬,产生多种毒素及侵袭酶,损害肌肉组织引起厌氧性肌炎。由于本菌分解组织中的肌糖,产生大量气体充塞组织间隙,造成气肿,挤压软组织,阻碍血液循环,进一步促使肌肉坏死。同时毒素还可引起血管壁通透性增高,浆液渗出,形成扩散性水肿,以手触压肿胀组织可发生“捻发音”。疼痛剧烈,蔓延迅速,最后形成大块组织坏死。细菌一般不侵入血流,局部细菌繁殖产生的各种毒素以及组织坏死产生的毒性物质被吸收入血,引起毒血症而死。
2.食物中毒
某些A型菌株能产生肠毒素,食其污染的食物后,可引起食物中毒。潜伏期短,约8~22小时,发生腹痛、腹泻、便血等症状,较少呕吐,一般不发热,1~2日内可自愈。中毒机理类似霍乱肠毒素,激活小肠粘膜细胞的腺苷酸环化酶,导致cAMP浓度增高,使肠粘膜分泌增加,肠腔大量积液,引起腹泻。
3.急性坏死性肠炎
由C型产气荚膜梭菌引起,致病物质可能为β毒素。潜伏期不到24小时,发病急,有剧烈痛、腹泻、肠粘膜出血性坏死,粪便带血;可并发周围循环衰竭、肠梗阻、腹膜炎等,病死率达40%。
(三)检验诊断
气性坏疽发病急剧,后果严重,及早诊断甚为重要。由于本菌分布广泛,所以单凭创口发现此菌还不足以诊断。尚需结合临床表现,才能确诊。
1.直接涂片镜检从伤口深部取材涂片,革兰氏染色镜检,可见革兰氏阳性大杆菌,并有荚膜,常伴有其他杂菌,白细胞甚少,形态不规则,这是气性坏疽标本涂片的特点。
2.分离培养与鉴定取坏死组织制成悬液,接种于血球脂平板上或疱肉培养基中,厌氧培养,观察生长情况。取细菌培养物涂片镜检,并进一步用生化反应鉴定。
3.动物实验 取培养液0.5~1ml给小鼠或家兔静脉内注射,10分钟后杀死动物,置37℃5~8小时。如动物躯体膨胀,即行解剖,可见脏器和肌肉内有大量气泡,尤以肝脏最为明显,称“泡沫肝”。取内脏或心血涂片镜检或分离培养,可发现有革兰氏阳性大杆菌,并有明显荚膜。
(四)防治原则
气性坏疽病原菌种类多,大多是数种细菌混合感染,所产生毒素型别多,抗原复杂,目前尚缺乏有将效的预防制剂。预防的办法主要是早期扩创,清洁伤口,局部用双氧水冲洗,以破坏厌氧环境。
除早期应用多价抗毒素外,应配合手术、抗生素及支持疗法等。近年来,临床用高压氧治疗气性坏疽,可使血液和组织中氧含量大于正常15倍左右,不利于厌氧细菌生长,有一定的疗效。
三、肉毒梭菌
肉毒棱菌(Cl.botulinum)为腐物寄生菌,广泛分布于土壤和动物粪便中。革兰氏阳性粗大杆菌。单独或成双排列,有时可见短链状。有周身鞭毛,无荚膜。芽胞椭圆形,大于菌体,位于次极端,使菌体似网球拍状,芽胞抵抗力甚强。严格厌氧,在普通琼脂培养基上形成直径3~5mm不规则的菌落,血液琼脂平板上有β溶血。能消化肉渣,使之变黑,有腐败恶臭。分解葡萄糖、麦芽糖及果糖,产酸产气。液化明胶,产生HzS,不形成吲哚。
肉毒梭菌的外毒素是已知毒素中最强的一种,它比氰化钾毒力还大一万倍,人服0.1微克即可致命,纯化的肉毒毒素1mg能杀死2亿只小鼠。与典型的外毒素不同,并非由生活的细菌释放,而是在细菌细胞内产生无毒的前体毒素,待细菌死亡自溶后游离出来,经肠道中的胰蛋白酶或细菌产生的蛋白激酶作用后方具有毒性,且能抵抗胃酸和消化酶的破坏。根据毒素抗原性不同,可分为A~G个型。其中主要引起人类食物中毒的为A、B、E型。各型之间抗原性不同,其毒性只能被相应的抗毒素所中和。内毒毒素是一种嗜神经毒素,经肠道吸收后进入血液,作用于脑神经核、神经接头处以及植物神经末梢,阻止乙酰胆碱的释放。妨碍神经冲动的传导而引起肌肉松驰性麻痹。肉毒中毒的发生,主要由于豆类、肉类、腊肠及罐头食品等被肉毒梭菌或芽胞污染,在厌氧条件下繁殖产生外毒素,被人食入所引起。表现为全身无力、视力模糊不清、吞咽及呼吸困难,严重者可因呼吸衰竭或心力衰竭而死亡。因毒素不直接刺激肠粘膜,故无明显的消化道症状。
婴儿肉毒病是由于婴儿肠道内缺乏能拮抗肉毒梭菌的正常菌群,食用被肉毒梭菌污染的食品后,芽胞在这情况下定居于盲肠,繁殖产生毒素引起的感染性中毒。表现为便秘、吮乳无力、吞咽困难,眼睑下垂,全身矶张力减退。严重者因呼吸肌麻痹而造成婴儿猝死。主要见于一岁以下儿童。
诊断的依据主要是检测毒素,标本为食品、病人粪便或血清,用已知抗肉毒血清在小白鼠体内作中和试验,或用反向间接血凝试验。
预防的原则是加强食品卫生的管理,多价抗毒素血清可作紧急预防和治疗。
第二节 无芽胞厌氧菌
在细菌引起的感染中,厌氧梭状芽胞杆菌(破伤风、气性坏疽,肉毒梭菌等)所引起的感染早被临床重视。无芽胞厌氧菌感染却常被忽视,近年来由于科学仪器、实验方法的进展,发现无芽胞厌氧菌引起感染逐年增加,引起临床广泛重视。
无芽胞厌氧菌均为正常菌群,在下述条件下才引起内源性感染:①因手术、拔牙、肠穿孔等原因,使屏障作用受损,致细菌侵入非正常寄居部位。②长期应用抗生素治疗使正常菌群失调。③机体免疫力减退。④局部组织供血不足、组织坏死、或有异物及需氧菌混合感染,形成局部组织厌氧微环境。
无芽胞厌氧菌的致病力往往不强,细菌的种类不同其致病物质也不完全相同。无芽胞厌氧菌的感染往往无特定的病型,常引起局部的炎症、脓疡和组织坏死等,并可累及全身各个部位,如中耳炎、鼻窦炎、牙周脓肿、坏死性肺炎、肺脓疡、腹膜炎、阑尾炎、盆腔脓肿、子宫内膜炎、骨髓炎、败血症、脑脓疡等。在此类感染中,往往同时存在有几种厌氧菌,亦还可能在需氧或兼性厌氧菌。应结合病情和标本中出现的优势菌做出厌氧感染的判断。
具有下列特征之一时,应考虑无芽胞厌氧菌的感染:①发生在口腔、鼻窦、胸腔、腹腔、盆腔和肛门会阴附近的炎症、脓肿及其他深部脓肿。②分泌会为血性或黑色,有恶臭。③分泌物直接涂片镜检可见细菌,而在有氧环境中培养无菌生长。④血培养阴性的败血、感染性心内膜炎、脓毒血栓性静脉炎。⑤使用氨基糖甙类抗生素长期治疗无效者。
一、厌氧性球菌
(一)消化球菌属(Peptococcus)
是口腔、肠道、女性生殖道、皮肤等处的正常菌群。革兰氏阳性球菌,直径0.5~1um,成单个、双个、四联或小堆。无鞭毛、无芽胞、专性厌氧菌。
本菌为条件致病菌,常和其他菌混合感染,也可单独感染。在菌血症、手指感染、乳腺脓肿、前列腺炎、肺部感染、中耳炎和各种化脓性感染时均可分离到消化球菌。在一些口腔感染性疾病时,如牙髓感染时也可分离出消化球菌。
(二)消化链球菌属(Peptostreptococcus)
菌体为革兰氏阳性,易变为革兰氏阴性菌,园形或卵园形,大小不等,直径0.3~1um,成双、短链状、无鞭毛、无芽胞。专性厌氧。
口腔、上呼吸道、肠道、女性生殖道正常菌群。本菌属中以厌氧消化链球菌(P.anaerobic)最常致病。消化链球菌可引起与诺非氏芽胞杆菌相似的急性坏疽,脓恶臭,产气较少而水肿严重。这种气性坏疽战伤多见,平时较少。口腔、上呼吸道、肺胸膜感染中可出现,微小消化链球菌寄生于口腔牙缝,直径0.3~0.5um,对糖和蛋白均无反应,常由于拔牙进入血循环引起亚急性细菌性心内膜炎,也常在头颈部、口咽、上呼吸道感染中出现。
(三)韦荣氏球菌属(Veillonella)
革兰氏阴性厌氧性微小球菌,直径0.3~0.5um,初期培养为革兰氏阳性,过夜转为阴性。成双、短链或团块,无荚膜,无鞭毛,无芽胞。
产生内毒素,因此在各种混合感染中起作用。常从软组织脓肿及血液中检出。可见于上呼吸道及肠道感染。它缺乏酵解糖类和多元醇地能力,在动物和人的自然腔道中大量存在。分布于口腔、咽部、呼吸道、消化道、发性阴道的正常菌群。一旦牙齿上有革兰氏阳性菌移植,韦荣氏菌随之移居而使菌斑明显增多,它能消耗乳酸,故人们推测此菌可能有使龋齿减少的作用。
二、革兰氏阴性无芽胞厌氧杆菌
(一)类杆菌属(Bacteroides)
1.脆弱类杆菌(B.fragilis)能分解糖,对胆汁耐受。为类杆菌属的代表株。革兰氏阴性杆菌,两端钝圆而浓染,中间有不着色部份。专性厌氧、无芽胞、无动力、直径为0.5×1.3~1.6um 。专性厌氧菌,氯化血红素和20%胆汁可促进其生长。牛心、牛脑液血平皿培养48小时,菌落1~3mm ,园,微凸,灰白,表面光滑,边缘整齐,大多不溶血。生化反应弱,解糖。解酶反应阳性,葡萄糖的终末代谢产物有乙酸和琥珀酸;吲哚不定,耐胆盐,水解七叶灵。不还原硝酸盐。产生苹果酸盐脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)、6磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGDH)、细胞壁粘肽层含有二氨基庚二酸。依据对鼠李糖、海澡糖,甘露醇发酵及吲哚试验可区别本组菌落。DNA的G+C含量为39~48%。本菌主要分布于结肠和口腔中。
脆弱类杆菌致病因素有内毒素,由脂多糖和类脂A构成。脂多糖决定其抗原性,类脂A决定其毒性。由于它的内毒素的化学结构与典型内毒素不同,所以毒性比一般内毒素为低,但发现它的内毒素在体外能抑制中性白细胞的趋化性和吞噬作用。脆弱类杆菌还能产生β-内酰胺酶,破坏青霉素,故对青霉素有耐药性。本菌还产生肝素酶,这种酶有利于形成血栓性静脉炎和迁徒性脓肿。脆弱类杆菌还分泌透明质酸酶,DNA酶,神经氨酸酶等,均与其侵袭力有关。脆弱拟杆菌E抗原与其致病性有关,如化脓,白血球先降低后升高,肝、肺,肾组织病变等。在临床上的无芽胞厌氧菌感染中占有重要的地位。
2.产黑色素类杆菌(B.melaninogenicus)目前有些文献将类杆菌属中中度解糖、不耐2%胆盐的类杆菌统称为普氏菌属(Prevolla)。产黑色素普氏菌为代表株。
革兰氏阴性多形性杆菌,专性厌氧,有荚膜与菌毛,无芽胞,无动力。血平板上的菌落0.5~2毫米。一般为圆形、凸起、有光泽、光滑。可以是半透明、不透明、灰色、棕色或黑色的菌落,可以有溶血,葡萄糖肉汤终未ph 4.5~5.2 ,最适生长温度是37℃,但有些菌株的生长温度是25或45℃。6.5%NaCL可抑制其生长,培养时需要维生素K和氯化血红素,20%的胆汁可抑制其生长,能产生乙酸和琥珀酸,产生苹果酸盐脱氢酶、谷氨酸脱氢酶,但不具有葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)、6磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGDH),吲哚大多为阴性,不还原硝酸盐,G+G含量40~52%,能产生胶原酶、蛋白水解酶,能水解胶原组织,能侵袭胶原组织,以建立厌氧病灶,其代谢过程中还产生DNA酶,硫化氢,吲哚及大量的氨,能溶解粘膜上皮。这些有害代谢产物在厌氧感染中起着关键作用。为口腔,肠道等部位的正常菌群,常与其他细菌混合感染,可从多种检材中检出。
3.不解糖的类杆菌 目前不解糖、不耐2%胆盐的菌株(如牙龈类杆菌等)已独立成一新属,称为卟啉菌属(Porphyromonas)。包括有3种,分别是牙龈卟啉菌(P.gingvalis)、不解糖卟啉菌(P.assacharolytica)、牙髓卟啉菌(P.endodontalis)。
革兰氏阴性杆菌或球杆菌,专性厌氧,无芽胞,无动力。肉汤中细菌的大小为0.5×0.8×1.0或3.5um,血平板上的菌落为光滑、光泽、凸起、直径1~3毫米。培养一定时间后菌落由边缘逐步向中心变黑,最后整个菌落变黑。产生苹果酸盐脱氢酶、谷氨酸脱氢酶,但不具有葡萄糖6磷酸脱氢酶(G6PDH)、6磷酸葡萄糖脱氢酶(6PGDH)、吲哚阳性。不水解淀粉和七叶灵,不还原硝酸盐,G+C含量40~52%。卟啉菌与牙髓感染、牙源性脓肿和牙周炎有特殊关系。
(二)梭形杆菌属(Fusobacterium)
由于菌体形态两端尖锐呈梭形而得名。存在于人和动物口腔、上呼吸道、肠道、泌尿系的正常菌群,以口腔居多。
革兰氏阳性,小或中等在小两端钝圆形的杆菌,无鞭毛,无芽胞,无荚膜。培养需专性厌氧,最适温度37℃,pH7.0营养要求不高,可在普通培养基上生长。硫乙醇酸盐和半胱氨酸对其有抑制作用。不产生触酶,对H2O2敏感,培养基吕触酶能刺激其生长。
梭形杆菌可与螺旋体混合感染,引起急性溃疡性龈炎,急性坏死龈炎等。在人类严重炎症性牙周病中此二菌大为增加,而疾病减轻时则减少。故也有人将其牙周疾病治疗效果观察指标之一。
三、革兰氏阳性无牙胞厌氧杆菌
(一)双歧杆菌属(Bifidobacterium)
为革兰氏阳性厌氧杆菌,具分叉末端,主要寄居于肠道及龈下菌斑。其致病作用目前尚不清楚。
在正常情况下,双歧杆菌无致病作用,和人保持着和谐的共生关系,据研究报道它具有一系列生理作用,如合成维生素、与其他厌氧菌在粘膜表面形成生物屏障、防止外袭菌、刺激免疫功能、激活巨噬细胞、提高宿主抗感染能力及抗肿瘤等功能。已研制成生物制剂应用物临床,在防治生态失调和防老防癌等方面取得一定效果。
(二)乳杆菌属(Lactobacillus)
乳杆菌属乳酸杆菌科,因发酵糖产生大量乳酸而命名。存在广泛。嗜酸性,最适pH5.5~6.0,pH3.0~4.5仍能生存,在无芽胞杆菌中其耐酸力最强。
妇女青春期阴道内乳酸杆菌可分解分泌物中的糖产酸,抑制致病菌的生长。肠道乳酸杆菌可分解糖产酸,抑制致病菌及腐败菌的繁殖,乳酶生即由活的乳酸杆菌制成,可治疗消化及腹泻。酸牛奶中的乳酸杆菌也有抑制肠道致病菌的作用。
乳酸杆菌是否为龋齿病原,目前仍无肯定结论,但龋齿活动状态与唾液乳酸液杆菌计数之间有明确的相互关系。
四、无芽胞厌氧菌感染防治原则
无芽非金属厌氧菌为人体正常菌群,属于条件致病菌,其感染为内源性感染,故缺乏特异有效的预防方法。外科清创引流是预防厌氧菌感染的一个重要措施。
大多数无芽胞厌氧菌对青霉素、氯霉素、氯林可霉素、头孢菌素敏感,均可用于治疗,而对氨基糖甙类抗生素不敏感,对四环素亦大多耐药。脆弱类杆菌能产生β-内酰胺酶,破坏青霉素和头孢菌素,故对此类药物耐药,在治疗时须注意。应选氯霉素和氯林可霉素。此外,灭滴灵对厌氧感染也有很好的疗效。由于厌氧菌常与其他需氧或兼性菌混合感染,在选用药物时应有全面考虑,二者兼顾。
第三节 厌氧菌的检验
一、标本采集
许多无牙胞厌氧菌是人体的正常菌群,在采集标本时尽量避免正常菌群的污染。应该采取没有正常菌群污染的标本。标本采取后应迅速送检,立即接种,放入厌氧环境中培养,尽量减少空气接触,以免厌氧菌死亡。
二、涂片镜检
脓液标本可直接涂片染色后观察细菌形态特征、染色性、菌数多少等供选择培养基和判定结果时参考。
三、接种培养
厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌,必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂,或用物理、化学方法去除环境中的游离氧,以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基,牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多,可根据实际情况选用。
1.厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养,厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来。
2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育。
3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名。箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着。欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气(H2,CO2,N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门。箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。